上海 外菜 vx

您好，欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
中 | |
400-6111-883
产品中心
上海 外菜 vx > 产品中心 > 逆转录 > 逆转录酶
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶
产品货号：11300ES92
产品规格：10000 U
产品价格：¥ 1623.00
类别：逆转录酶

说明书下载

  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格（元）

    Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

    11300ES92

    10000 U

    1623.00

    11300ES93

    50000 U

    5623.00

     

    产品描述

     

    Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。

     

    产品组分

     

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11300ES92 (10000 U)

    11300ES93 (50000 U)

    11300-A

    Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    50 μL

    250 μL

    11300-B

    5×Hifair® V Buffer

    250 μL

    1.25 mL

     

    产品应用

     

    一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。

     

    活性定义

     

    以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

     

    运输与保存方法

     

    冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

     

    注意事项

     

    1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

    2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；

    3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；

    4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    第一链cDNA合成操作步骤

     

    1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

    组分

    使用量

    RNase free ddH2O

    to 13 μL

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    or Random Primers (50 μM)  

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    1 μL

    or 1 μL

    or 1 μL

    模板RNA

    Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng

    65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

    2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

    组分

    使用量

    上一步的反应液

    13 μL

    5×Hifair® V Buffer

    4 μL

    dNTP Mix (10 mM)

    1 μL

    Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    1 μL

    RNase inhibitor (40 U/µL)

    1 μL

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25℃

    5 min

    42℃

    15-30 min

    85℃

    5 min

    【注】 

    1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

    2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。

    3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

    ※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

    ※ 该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

     

    相关产品

     

    产品名称

    货号

    规格

    价格（元）

    Murine RNase Inhibitor(40 U/µL) 鼠源RNase抑制剂

    10603ES05/10

    2/10 KU

    216/916

    Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase（配体法热启动DNA聚合酶）

    10110ES72/80

    250/1000 U

    186/636

    Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）

    10113ES60/76

    100/500 U

    216/656

    Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

    11205ES08

    5 mL

    740

    Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix

    11208ES08

    5 mL

    5565

    Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

    10303ES60/76

    100/500 U

    683/3083

    dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）

    10128ES72/80

    0.25/1 mL

    253/853

    dNTP Mix (25 mM each)

    10125ES72/80

    0.25/1 mL

    116/353

     

    HB210923